转录因子EB及其靶基因在硼替佐米治疗多发性骨髓瘤中的作用及分子机制

作者：荣娟 Rongjuan 张 Zhang, 紫琳 Zilin 王 Wang, 小敏 Xiaomin 石 Shi, 姝苑 Shuyuan 张 Zhang, 玮. W. 王 Wang, 铭帅 Mingshuai 马 Ma, 冲. C. 栗 Li, 翠红 Cuihong 谷 Gu, 志华 Zhihua 张 Zhang · 发表于：Zhonghua xue ye xue za zhi = Zhonghua xueyexue zazhi · 年份：2025 · DOI：10.3760/cma.j.cn121090-20250614-00276 · 研究领域：Medicine

目的 探索转录因子EB（TFEB）及其靶基因在硼替佐米治疗多发性骨髓瘤（MM）中的作用及分子机制。 方法 通过GTRD网站（http://gtrd.biouml.org/）预测TFEB靶基因，筛选出Ptch1基因。实时荧光定量PCR和Western blot法检测硼替佐米作用于MM细胞系RPMI8226和U266后Ptch1的表达变化。siRNA-TFEB分别转染RPMI8226和U266细胞系，实时荧光定量PCR和Western blot法检测Ptch1/Hedgehog信号通路关键因子（Ptch1、Gli1）的mRNA和蛋白相对表达情况。在MM细胞系中用慢病毒转染过表达Ptch1，吖啶橙染色观察自噬现象，Western blot法检测各组细胞自噬相关因子（LC3B、Beclin-1、Lamp-1）蛋白相对表达量，溶酶体荧光探针观察溶酶体数量变化。 结果 硼替佐米（6.0×10−6 mmol/L）处理RPMI8226和U266细胞系24 h，硼替佐米组Ptch1的mRNA和蛋白的相对表达水平均较空白对照组降低（P值均<0.05），转染siRNA-TFEB后逆转了硼替佐米对Hedgehog通路中关键因子Ptch1、Gli的抑制作用。Ptch1过表达显著减少了经硼替佐米处理的RPMI8226和U266细胞系中自噬相关因子LC3B、Beclin1、Lamp1蛋白的相对表达量（P值均为0.001）。吖啶橙染色显示两种细胞系酸性囊泡数量均减少（P值均为0.001），反映溶酶体数量的溶酶体探针相对荧光表达亦减少（RPMI8226和U266细胞系的P值分别为0.001、0.007）。 结论 敲低TFEB可靶向促进Ptch1/Hedgehog信号通路表达而减少硼替佐米诱导的MM细胞自噬，并逆转硼替佐米对MM细胞系的增殖抑制作用。