Pp2cm基因沉默对小鼠巨噬细胞通过TLR通路抵抗金黄色葡萄球菌感染的影响

作者：Kaiteng Luo, Mao-zhao Xie, Wei Yang, Tao Li, Chunling Jiang · 发表于：Sichuan da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Sichuan University. Medical science edition · 年份：2023 · DOI：10.12182/20230960206 · 研究领域：Medicine

目的 探究蛋白磷酸酶2Cm（protein phosphatase 2Cm, PP2Cm）的基因Pp2cm沉默对感染金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S. aureus）后巨噬细胞炎症因子表达的影响及作用机制。 方法 通过腺病毒（adenovirus, Ad）转染Raw264.7小鼠巨噬细胞系分析了Pp2cm基因敲低对巨噬细胞炎症因子、细胞增殖凋亡和Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）信号通路的影响。细胞处理分为4组，包括Ad-Ctrl组、Ad-Pp2cm组、Ad-Ctrl+S. aureus组和Ad-Pp2cm+S. aureus组。分别在细胞中加入对照腺病毒（Ad-Ctrl）或针对Pp2cm基因的腺病毒（Ad-Pp2cm），使用或不使用金黄色葡萄球菌进行炎症诱导。实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin 1 beta, IL-1β）、TLR2、TLR4、Toll样受体衔接蛋白（Toll-like receptor adaptor protein, Tirap）和髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88, Myd88）基因表达，蛋白印迹法（Western blot）技术检测PP2Cm蛋白表达，Cell Counting Kit-8（CCK-8）法测定细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡。 结果 Ad-Pp2cm组巨噬细胞Pp2cm mRNA和PP2Cm蛋白表达水平均低于Ad-Ctrl组，差异有统计学意义（P<0.05）。与Ad-Ctrl+S. aureus组相比，Ad-Pp2cm+S. aureus组巨噬细胞中TNF-α与IL-1β基因表达水平升高，差异有统计学意义（P<0.01）。与Ad-Ctrl组巨噬细胞相比，Ad-Pp2cm组巨噬细胞中TLR2、TLR4、Tirap 和Myd88基因表达水平升高，差异有统计学意义（P<0.05）。Ad-Ctrl组与Ad-Pp2cm组巨噬细胞的细胞凋亡和细胞增殖差异无统计学意义。 结论 Pp2cm基因沉默促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌感染的炎症响应。TLR通路在巨噬细胞炎症激活过程中发挥重要作用。