SESN2对Erastin诱导的肾小管细胞铁死亡和急性肾损伤的保护作用

作者：Tao Song, Meiyan Liu, Qing Wan, Jie Min, Yi Zhong, Hong Gao · 发表于：Zhong nan da xue xue bao. Yi xue ban = Journal of Central South University. Medical sciences · 年份：2026 · DOI：10.11817/j.issn.1672-7347.2026.250601 · 研究领域：Medicine

目的 如何防治围手术期常发生的急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)一直是临床实践关注的核心。本研究旨在探讨应激诱导蛋白2(sestrin2，SESN2)在铁死亡诱导剂Erastin诱导的肾小管细胞铁死亡和ICR小鼠AKI中的作用及机制。 方法 体外试验方面，采用稳定转染慢病毒的人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2，分为体外对照组、Erastin体外模型组、SESN2体外干预组3组。体外对照组采用空载体慢病毒LV-Con进行转染；Erastin体外模型组转染LV-Con后给予10 μmol/L的Erastin，处理24 h；SESN2体外干预组转染SESN2过表达慢病毒LV-SESN2后，同样给予10 μmol/L的Erastin进行处理。体内试验方面，通过检测血肌酐(serum creatinine，SCr)和血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)水平验证和评估Erastin诱导的AKI小鼠模型的成功建立后，将18只健康成年ICR雄性小鼠随机分为体内对照组、Erastin体内模型组、SESN2体内干预组3组，每组各6只。体内对照组采用尾静脉注射空载对照病毒AAV9-Con；Erastin体内模型组采用尾静脉注射AAV9-Con，4周后腹腔注射Erastin(30 mg/kg)；SESN2体内干预组采用尾静脉注射SESN2过表达病毒AAV9-Sesn2，4周后腹腔注射Erastin(剂量同Erastin体内模型组)。造模成功24 h后收集血清和肾组织。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测细胞和组织的上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、白细胞介素(interleukin，IL)-6及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α水平。采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA)荧光探针法和二氢乙啶(dihydroethidium，DHE)荧光染色法检测活性氧(reactive oxygen species，ROS)的荧光强度。采用比色法检测丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、亚铁离子(Fe2+)水平；采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide，Annexin V-FITC/PI)、原位末端转移酶标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL)和双染流式细胞术计算细胞凋亡率。采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR，real-time RT-PCR)及蛋白质印迹法检测SESN2、核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4，GPX4)和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1，FSP1)的mRNA及蛋白质表达情况。 结果 与体外/体内对照组相比，Erast...